Kötü haber şu ki, HPLC sütunları genellikle bu kötü muamele yüzünden ölüyor. Aynı sorunları yaşadık ve sonunda bir öğrencinin ihmali nedeniyle birkaç pahalı sütun atıldı. Asetonitril, bir fosfat tamponu ile% 90'ın üzerinde kullanıldığında kolon içinde çökelmeye yol açar. Kolon üretim teknolojisi konusunda çok tecrübem var. Mobil fazlara asla antibiyotik eklemezsiniz. Bu yüzden endişelenme. ACN ve MeOH gibi çözücülerin kendileri, bakterilerin kolon içinde hayatta kalmamasını sağlar. Bu, sütunu yıkadıktan ve tüm tamponun bittiğinden emin olduktan sonra tipik saklama çözücüsüdür.
Kurtarma prosedürü aşağıdaki gibi olabilir:
-
Sütunu şu konumda çalıştırın gerçekten düşük akış hızları , yüksek sulu içerikle (90/10 H2O / ACN) 0,1 mL / dk. Basınç çok yüksekse, akış yönünü değiştirin. Sütunların üzerlerinde işaretlenmiş bir akış yönü vardır. Daha düşük bir basıncı gösteren yönü deneyin.
-
Baskıyı kaydedin, eğer basınç yavaşça düşerse, bu çok iyi bir haber.
-
Adım 2 iyi giderse, gece boyunca 0,1 mL / dk'da yıkayın. Her şey yolunda giderse, sabah basınç normale döner, gitmekte fayda var.
-
Asla köşeyi seslendirmeyin. Yatağa kalıcı olarak zarar verir.
P.S. Faz çöküşünün, kolon içindeki çökelme problemiyle hiçbir ilgisi yoktur. Bu tamamen farklı bir hikaye. Lütfen LC-GC dergisinden gelen bu öneriyi kullanmayın (yukarıdaki yorumdaki bağlantı). Ron Majors çok tecrübeli ama burada başka bir konudan bahsediyor.
Faz çökmesi iyi anlaşılmış bir fenomen değil, daha iyi bir kelime ıslatmaktır. C18 fazı oldukça hidrofobik olduğundan, yüksek oranda sulu hareketli fazlara sahip olduğundan, gözenekler (tüm tutulmanın meydana geldiği) suyu dışarıda bırakır. Kromatograflar, özellikle de kamu okurları için ticari dergilerde yazan kişiler, pek çok hayal gücü yapma eğilimindedir.
Sütun basıncı normale dönerse, ayırmayı tekrarlayın ve eski ayırma. Saklama süresi benzer ise endişelenmenize gerek yok. Azaltılmışsa, LCGC önerisini deneyin. Basınç, tüm ppt'nin gidip gitmediğini doğrulamak için ana testtir.